產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿中的抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體（AECA）水平。檢測范圍覆蓋常規(guī)科研適配區(qū)間，靈敏度滿足微量樣本檢測需求，適用于血管炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血管內(nèi)皮損傷及自身免疫病相關(guān)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)elisa試劑盒
英文名稱：AECA ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-0957E
檢測原理：
小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體 (AECA) ELISA 試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
固相化：微孔板預(yù)先包被血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，AECA 與固相抗原結(jié)合。
檢測：加入酶標(biāo)記的抗小鼠免疫球蛋白二抗，形成 "抗原 - 抗體 - 酶標(biāo)二抗" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，抗體水平與 OD 值成正比。
實驗步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
?1、試劑與樣本準(zhǔn)備?：
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），按說明書稀釋洗滌緩沖液（通常1:19）。
?標(biāo)準(zhǔn)品?：用梯度稀釋至0.313、0.625、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL系列濃度。
?樣本?：血清、血漿或組織勻漿上清。若t-PA濃度高，可按說明書（如1:10）稀釋。
?2、加樣與孵育?：
每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本。
輕輕振蕩混勻，避免觸碰孔壁。
37℃孵育90分鐘（部分試劑盒可能為120分鐘，需以說明書為準(zhǔn)）。
?3、洗滌?：
棄去孔內(nèi)液體，用洗滌緩沖液加滿每孔，靜置30秒后甩干，重復(fù)5-6次。
4?、加檢測抗體與孵育?：
每孔加入100μL化抗豬t-PA檢測抗體。
37℃孵育60分鐘。
5?、再次洗滌?：
同步驟3，洗去未結(jié)合抗體。
6?、顯色?：
每孔加入90-100μL TMB底物混合液（A液+B液）。
37℃避光孵育10-15分鐘。
?7、終止與測定?：
每孔加入50μL終止液，立即混勻（顏色由藍(lán)變黃）。
在加終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定各孔吸光度（OD值）。
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