產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)大鼠血清、血漿中的 ICA 抗體濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于 1 型糖尿病診斷、胰島自身免疫、胰腺疾病及免疫性內(nèi)分泌病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)elisa試劑盒
英文名稱：ICA ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào)：CS-5284E
檢測(cè)原理：
大鼠胰島細(xì)胞抗體 (ICA) elisa 試劑盒的原理是?間接法?，通過固相載體包被抗原，捕獲樣本中特異性抗體，再用酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行識(shí)別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測(cè)。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被大鼠胰島細(xì)胞抗原。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，ICA 抗體與固相抗原結(jié)合。
?檢測(cè)?：加入 HRP 標(biāo)記的抗大鼠 IgG 二抗，與固相載體上的抗體形成復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?：每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.試劑平衡試劑盒室溫平衡 30 min；濃縮洗滌液按說明書稀釋混勻。
2.設(shè)孔加樣設(shè)空白、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣，封板。
3.溫育結(jié)合37℃孵育 30–60 min，棄液拍干。
4.洗板加滿洗滌液浸泡，甩干拍干，重復(fù)3–5 次。
5.加酶結(jié)合物除空白孔外每孔加 HRP 標(biāo)記液，封板 37℃孵育。
6.再次洗板充分洗凈未結(jié)合游離酶，控干殘留液體。
7.顯色避光加顯色液 A/B，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)加終止液變色穩(wěn)定后，立刻酶標(biāo)儀讀 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，換算樣本濃度。
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